Verižna reakcija s polimerazo (PCR) je ena najbolj znanih metod v laboratorijih znanosti o življenju.
PCR plošče so izdelane iz prvovrstne plastike za odlično rokovanje in analizo zbranih vzorcev ali rezultatov.
Imajo tanke, enotne stene, ki zagotavljajo natančen prenos toplote.
V pripravah za uporabo v realnem času se drobne frakcije DNK ali RNK izolirajo in shranijo na PCR plošče.
PCR plošče so zelo učinkovite pri toplotnem varjenju in tudi omejujejo pretok toplote.
Ker pa so plošče PCR učinkovite in zanesljive, so nagnjene k napakam in netočnostim pri obdelavi vzorcev.
Torej, če vas zanima kakovostna PCR plošča. Najbolje je, da se obrnete na zanesljivega proizvajalca plošč PCR. S tem ste lahko prepričani, da boste dobili najboljšo ceno.
Spodaj je navedenih nekaj varnostnih ukrepov za preprečevanje kontaminacije reagentov ali vzorcev in za preprečevanje netočnih rezultatov.
Razkužite okolje
Nepravilni pozitivni ali negativni rezultati zaradi prisotnosti nečistoč lahko povzročijo dvom o rezultatih.
Nečistoče in onesnaževalci so v različnih oblikah, kot so nepovezana DNK ali kemični dodatki, ki na koncu zmanjšajo učinkovitost in uspešnost reakcije.
Obstaja veliko načinov za močno zmanjšanje stopnje kontaminacije PCR plošč.
Uporaba steriliziranih konic filtrov je še en uporaben način za preprečevanje vdora nečistoč v vzorec skozi pipeto.
Za uporabo PCR je na voljo popolnoma čist komplet opreme, vključno s pipetami in nosilci. To bo zagotovilo zanemarljiv prenos nečistoč ali kontaminantov po laboratoriju.
Uporabite belilo, etanol na pipetah, stojalih in klopeh, da obrišete kontaminacijo.
Dodelite rezerviran prostor za vse reakcije PCR, da dodatno zmanjšate kontaminacijo z delci.
Pri vsakem koraku uporabljajte čiste rokavice in jih pogosto menjajte.
PCR plošča
Preverite koncentracijo in čistost predloge.
Ohranjati je treba čistočo miz in opreme, ki se uporablja za analizo vzorcev s PCR. Ključnega pomena je preveriti čistost vzorcev pred analizo in obdelavo.
Običajno analizator upošteva koncentracijo in stopnjo čistosti vzorca DNK.
Razmerje absorbance 260nm/280nm ne sme biti manjše od 1,8. Nečistoče so bile nato identificirane z uporabo valovnih dolžin med 230 nm in 320 nm.
V enem primeru so bile kaotropne soli in druge organske spojine odkrite pri absorbanci 230 nm. Hkrati zaznajte in preverite motnost v vzorcih DNK pri absorbanci pri 320 nm.
Izogibajte se preobremenitvi PCR plošč in izdelkov
Čeprav je zaželeno uporabljati več izdelkov hkrati, lahko to privede do navzkrižne kontaminacije plošč PCR.
Preobremenitev plošč PCR z različnimi izdelki je potratna in otežuje identifikacijo vzorcev.
Vodite evidenco alikvotov reagentov PCR
Neprekinjeni cikli zamrzovanja/odmrzovanja in pogosta uporaba alikvotov lahko s prekristalizacijo poškodujejo reagente PCR, encime in DNTP.
Pri pripravi vzorcev za analizo si vedno prizadevajte spremljati količino uporabljenih alikvotov.
Prednostni LIMS je bolj primeren za nadzor zalog in količin reagentov in vzorcev, ki jih je treba zamrzniti ali odmrzniti.
Izberite optimalno temperaturo žarjenja.
Izbira in uporaba napačne temperature žarjenja je še en način, na katerega rezultati PCR vsebujejo napake.
Včasih odziv ne gre po načrtih. Za uspešno reakcijo je treba temperaturo žarjenja znižati.
Vendar znižanje temperature poveča možnost lažno pozitivnih rezultatov in začetnih dimerjev.
Pri uporabi PCR plošč je pomembno potrditi analizo talilne krivulje, saj je dober pokazatelj za izbiro pravilne temperature žarjenja.
Programska oprema za načrtovanje temeljnega premaza pomaga pri načrtovanju, zagotavlja pravilno temperaturo žarjenja in neposredno zmanjšuje napake v ploščah PCR.
pcr plošča