proces kulture celic sesalcev
Sesalske celice gredo skozi proces ekstrakcije tkiv, primarne kulture in subkulture. Subkultura se lahko glede na pogoje razdeli na kulturo celične linije in celično linijo. Vsak postopek je na kratko opisan na naslednji način:
Primarna kultura: Ko se tkivo odstrani iz živali, je mleto, obdelano z različnimi encimi (običajno trypsin), chelating agenti (običajno EDTA) in mehanske metode (ponavljajoče se tesnjenje in pihanje pipete), nato pa razpršeni v posamezne celice, gojeni v ustreznem mediju, ki omogoča celicam preživetje, rast in razmnoževanje. Primarna celična kultura se na splošno nanaša na celično kulturo znotraj 10 odlomkov, potem ko se celice odstranijo iz živali.
Po primarni celični kulturi, razdelitvi celic in razmnoževanju se kultura postopoma povečuje, rast zapolni kulturni prostor, nato pa se stiki med seboj, kar povzroči kontaktno zaviranje, stopnja rasti pa se postopoma upočasni ali celo ustavi. Ponovno jo je treba zasejati v nove kulturne bučke za subkulturo.
Prehod (prehod): Primarne celice se izvlečejo iz kulturne bučke, celična vzmetenje je pripravljena in razdeljena na dve ali več kulturnih bučk za nadaljnjo kulturo, ki se imenuje subkultura.
Celična vrstica: celična vrstica je celična vrstica po prvem prehodu v primarni kulturi. Če je čas preživetja celične vrstice omejen, se imenuje črta celice. Celična vrstica, ki pridobi neomejeno sposobnost reprodukcije in nadaljuje z preživetjem, se imenuje nepretrgana celična linija ali neskončna celična linija.
Celična vrstica: Iz biološko identificiranih celičnih vrstic se celična populacija, ki jo tvorijo enocelična osamljenost, kultura ali presejalna linija, imenuje celična vrstica. Celične populacije različnih oblik so nato izolirane in kultiviirane iz primarne celične črte, da tvorijo podklone.
Pogoji kulture celic sesalcev
Različne celice sesalcev zahtevajo osnovne pogoje kulture v vsaki fazi
1. sterilno in nestrupeno okolje: aseptično zdravljenje kulturnega medija in vse kulturne opreme; dodajanje antibiotikov v kulturni medij za preprečevanje kontaminacije med kulturnim procesom; redno nadomeščanje kulturnega medija za odstranjevanje metabolitov, da bi preprečili poškodbe kulturnih celic.
2. Prehrana: Tekoči sintetični medij vsebuje sladkorje, aminokisline, dejavnike za spodbujanje rasti, vodo, anorganske soli, elemente v sledeh itd. Običajno je treba dodati naravne sestavine, kot sta plazma in serum
3. Primerna temperatura in pH vrednost: Optimalna temperatura za človeške in sesalske celice je 36±0,5 °C. Primerna vrednost pH je 7,2-7,4.
4. Plinsko okolje: Plinsko okolje je na splošno "95% zrak + 5% ogljikov dioksid" mešani plin. Kisik je plin, potreben za celično presnovo, ogljikov dioksid pa ohranja pH medija.
