Kako nadzorovati čas prebave tripsina v bučkah s celično kulturo

Oblikovanje celic vključuje korake vbrizgavanja celic, oblikovanja in pridobivanja. Celice v bučki celične kulture morajo rasti in se razvijati do določene mere. V tem trenutku se je treba zanašati na tripsin, da prebavi celice na zunanji steni bučke in jo nato otipa. Pri encimih je treba nadzorovati čas prebave.

T75 bučka za celično kulturo

Tripsin spada v drug razred tripsina, ki lahko razgradi beljakovine na celičnih membranah, spojenih z bučkami celične kulture. Z raztapljanjem proteina na ustreznem delu se protein na stičišču med proteinoma raztopi, celica pa zaradi podporne sile celičnega ogrodja lastne notranje strukture postane sferična in s tem loči celice. Stopnja prebave tripsina je ključni dejavnik pri oblikovanju celic: čezmerna prebava poveča celične ostanke, črne ostanke se povečajo, celice bodo kot celota odpadle, kar bo resno ogrozilo celično sposobnost preživetja, nekatere celice pa bodo lebdele, z odpadnim odtokom tripsina; če prebava ni dovolj, je celicam težko odpihniti z notranje stene steklenice, neprekinjeno pihanje in udarjanje pa bo tudi poškodovalo celično aktivnost.

bučka celične kulture

Steklenička z raztopino kulture beljakovin seruma

V različnih ustanovah oziroma celicah učinek pankreasnih encimov ni enak. Aktivnost razpršenih celic pankreasnega encima je povezana tudi z vrednostjo njegove koncentracije, temperaturo in trajanjem učinka. Ko je pH 8.0 in temperatura 37, je raven učinkovitosti vodne raztopine encima trebušne slinavke razmeroma visoka. Pri uporabi tripsina je treba dobro nadzorovati koncentracijo, temperaturo in trajanje, da preprečimo poškodbe celic zaradi prekomerne prebave. Ker Ca2, Mg2 in serumske beljakovine, beljakovinski grami zmanjšajo aktivnost pankreatina, zato pri pripravi vodne raztopine pankreatina uporabimo BSS brez Ca2, Mg2, kot je: D-Hanksova raztopina. Pri zaustavitvi prebave lahko tripsin zaustavimo z medijem celične kulture serumskih beljakovin ali zaviralcem tripsina, da zaustavimo učinek tripsina na celice.

bučka kulture

T25 bučka celične kulture

Poleg tega, če gre za novo kupljeno celico, lahko uporabite nižjo koncentracijo tripsina, da najprej raziščete čas prebave in opazujete, ali se celice vsako minuto okrogle, ter naredite dober zapis. Skratka, pri pridobivanju celic v bučki za celično kulturo je treba nadzorovati čas tripsinizacije, da se učinkovito ohrani sposobnost preživetja celic.