Za bolezni, ki jih povzročajo virusne okužbe, se lahko za pojasnitev vrst virusov, ki jih je treba zdraviti, opravita naslednji dve vrsti pregledov:
1. Neposredno odkrivanje samega virusa
2. Lahko zazna antigen na površini virusa in nukleinsko kislino virusa.
Test je odkril protitelesa, proizvedena, da se uprejo virusu:
V normalnih okoliščinah testiranje na antigen ne zahteva visokih laboratorijskih pogojev in je primerno predvsem za obsežno presejanje v primarnih bolnišnicah; testiranje na protitelesa je enostavno za uporabo, rezultate testa pa je mogoče dobiti v 10-15 minutah. Za odkrivanje nukleinske kisline so potrebni številni laboratorijski pogoji, občasno osebje in oprema, vendar je stran z rezultati najbolj občutljiva in natančna.
Od 10 novih reagentov za odkrivanje nukleinskih kislin koronavirusa, ki so bili odobreni, jih 8 uporablja fluorescenčno metodo PCR, preostale metode odkrivanja pa so kombinirana metoda sekvenciranja polimerizacije, zasidrane s sondo, in metoda čipa za ojačanje s konstantno temperaturo.
1. Fluorescenčna PCR metoda
Metoda PCR se nanaša na verižno reakcijo polimeraze, ki lahko močno poveča količino DNK v sledovih. Kadar se uporablja za odkrivanje novega koronavirusa, ker je novi koronavirus virus RNA, je treba virusno RNA prepisati v DNK, preden izvedemo PCR detekcijo.
Načelo fluorescenčne detekcije PCR je, da se med potekom PCR reakcijski produkti še naprej kopičijo, sorazmerno pa se poveča tudi intenzivnost fluorescenčnega signala. Končno, spremembo količine produkta spremljamo s spremembo intenzivnosti fluorescence, s čimer dobimo krivuljo ojačanja fluorescence.
To je trenutno najpogosteje uporabljena metoda za odkrivanje nukleinske kisline novega koronavirusa. Vendar pa lahko naslednji dejavniki povzročijo napake v rezultatih testa:
Nepravilno shranjevanje ali nepredložitev na testiranje: RNA virusi se zlahka razgradijo. Zato jih je treba po pridobitvi bolnikovih vzorcev shraniti na standardiziran način in čim prej testirati. V nasprotnem primeru bo rezultat testa verjetno napačen.
Interpretacija rezultatov napak: trenutno odobreni testni izdelki so izbrani na podlagi odprtega bralnega okvirja 1a/b, beljakovin ovojnice in nukleokapsidnega proteina novega genoma koronavirusa. Vendar so zaznavki za odkrivanje in zasnove sonde različnih izdelkov različni, obstajajo pa razlike v odkrivanju in interpretaciji segmentov z enim tarčem, segmentov z dvojno tarčo in segmentov s tremi tarčami. Če torej interpretacija ni izvedena strogo v skladu z različnimi navodili, lahko povzroči napačno presojo rezultata.
2. Kombinirana metoda polimerizacijskega sekvenciranja, zasidrane s sondo
To odkrivanje je predvsem uporaba posebnega instrumenta za odkrivanje genskega zaporedja, ki ga nosijo nanosfere DNK na stekelcu za sekvenciranje.
Ta vrsta odkrivanja ima visoko občutljivost in ni lahko spregledati diagnoze, vendar na rezultate zlahka vpliva tudi veliko dejavnikov, vključno z:
Vzorci, ki niso testirani pravočasno: Tako kot pri fluorescentni PCR metodi so rezultati lahko netočni, če niso shranjeni na standardiziran način in testirani čim prej.
Sobna temperatura testnega mesta je previsoka: to bo vplivalo tudi na točnost rezultatov testa. Na rezultate lahko vplivajo tudi različni instrumenti in kompleti za testiranje.
3. Metoda čipa za ojačanje s konstantno temperaturo
Odkrivanje genskih čipov je ena od tradicionalnih viroloških diagnostičnih metod. Načelo detekcije je detekcijska metoda, razvita na podlagi komplementarnih veznih lastnosti nukleinskih kislin, ki se lahko uporablja za kvalitativno ali kvantitativno merjenje nukleinskih kislin, prisotnih v organizmih. V primerjavi s PCR ima genski čip višjo stopnjo natančnosti in krajši čas, vendar je tudi dražji in prepustnost detekcije (količina podatkov, ki se lahko ustvari na enoto časa) je relativno nižja.
Tokrat odobren termostatski čip lahko zazna šest vrst respiratornih virusov, vključno z novim koronavirusom. Rezultate lahko dobite v 1,5 urah,
V primerjavi s PCR ima genski čip višjo stopnjo natančnosti in krajši čas, vendar je cena dražja, prepustnost detekcije (količina podatkov, ki se lahko ustvari na enoto časa) pa je relativno nižja.
4. Odkrivanje protiteles proti virusom
Reagenti za odkrivanje protiteles se uporabljajo za odkrivanje protiteles IgM ali IgG, ki jih proizvede človeško telo po vstopu virusa v človeško telo. Protitelesa IgM se pojavijo prej, protitelesa IgG pa kasneje.
Trenutno pet novih odobrenih reagentov za odkrivanje protiteles proti koronavirusu uporablja metodo koloidnega zlata in metodo kemiluminiscence magnetnih delcev.
5. Metoda koloidnega zlata
Metoda koloidnega zlata za testiranje uporablja testni papir s koloidnim zlatom, ki je trenutno pogosto omenjan papir za hitro testiranje.
Ta vrsta testnega papirja je posebej označena in ima na njem luknje, s katerimi se odkapa vzorec seruma preiskovanca. Na testnem papirju koloidnega zlata sta dve črti, ena se imenuje testna črta, druga pa linija za nadzor kakovosti. Če sta obe črti obarvani, pomeni pozitivno; obarvana je le črta za nadzor kakovosti, kar pomeni negativno; razen v teh dveh primerih, spada v neveljaven rezultat.
