PCR odkrivanje
Verižna reakcija s polimerazo (PCR) uporablja kos DNK kot šablono, s sodelovanjem DNK polimeraze in nukleotidnega substrata pa se DNK pomnoži do zadostne količine za strukturno in funkcionalno analizo. Metoda PCR detekcije ima izjemno pomemben pomen pri hitri klinični diagnostiki bakterijskih nalezljivih bolezni.
Načelo PCR se uporablja za pomnoževanje fragmenta DNK, ki se nahaja med dvema znanima zaporedjema, podobno kot v procesu replikacije naravne DNK. Molekula DNK, ki jo je treba pomnožiti, se uporablja kot šablona, par oligonukleotidnih fragmentov, komplementarnih koncu 5' in 3' koncu predloge, pa se uporabi kot primera. Pod delovanjem DNK polimeraze sledi predlogi po polovično rezerviranem mehanizmu replikacije. Podaljšanje verige do zaključka nove sinteze DNK, ponovite ta postopek, ciljni fragment DNK se lahko pomnoži.
(PCR) je metoda za encimsko sintezo specifičnih fragmentov DNA in vitro. Sestavljen je iz več korakov visokotemperaturne denaturacije, nizkotemperaturnega žarjenja in ustreznega temperaturnega podaljšanja. Funkcije, kot so visoka občutljivost, enostavno upravljanje in prihranek časa. Uporablja se lahko ne samo v osnovnih raziskavah, kot so izolacija genov, kloniranje in analiza zaporedja nukleinskih kislin, ampak tudi pri diagnostiki bolezni ali kjer koli, kjer sta DNK in RNA. Verižna reakcija s polimerazo (polymerase Chain Reaction, na kratko PCR) je znana tudi kot molekularno kloniranje brez celic ali specifično zaporedje DNK in vitro encimsko amplifikacijsko tehnologijo, usmerjeno v primere.
Polrezervirana replikacija DNK je pomemben način za biološko evolucijo in prehod. Dvoverižna DNK se lahko denaturira in stopi v eno verigo pod delovanjem različnih encimov. S sodelovanjem DNA polimeraze in promotorja se lahko dvoverižna DNK replicira v isti dve molekuli po principu komplementarnega parjenja baz. V poskusih je bilo ugotovljeno, da se DNK lahko tudi pri visokih temperaturah denaturira in stopi, ob znižanju temperature pa se lahko ponovno renaturira v dvojne verige. Zato lahko z nadzorovanjem denaturacije in renaturacije DNK s temperaturnimi spremembami in oblikovanjem primerjev kot promotorjev dodajanje DNA polimeraze in dNTP dokonča in vitro replikacijo specifičnih genov.
Enostavno je, da uporabite posebno opremo, uporabite dNTPS, Mg2+, specifične primerje, DNK polimerazo in puferski sistem, dodate predlogo, ki je vzorec DNK za in vitro pomnoževanje, in opravite elektroforezo. Če ga je mogoče pomnožiti in je velikost pomnoženega produkta skladna s ciljnim pasom, to pomeni, da sta temeljni premaz in šablona specifična, indeks detekcije pa je pozitiven.
Metode in koraki odkrivanja nukleinskih kislin PCR
Testiranje nukleinske kisline zahteva pet korakov: vzorčenje, zadrževanje vzorca, zadrževanje, ekstrakcijo nukleinske kisline in računalniško testiranje.
Odkrivanje nukleinske kisline
Prvi korak je zbiranje človeškega izločka in brisanje nosne votline ali zadnje stene žrela in dvostranskih žrelnih tonzil z nazalnim testom ali testom žrela.
V drugem koraku je medicinsko osebje obdržalo vzorec, potopilo glavo testnega kosa v raztopino za konzerviranje celic in takoj po zlomu repa privilo pokrov epruvete.
V tretjem delu dajte vzorec v nepredušno vrečko, ga shranite in pravočasno pošljite na pregled.
Četrti korak je pošiljanje vzorca v laboratorij za ekstrakcijo nukleinske kisline.
V peti stopnji ekstrakt izpostavimo fluorescentni reakciji pomnoževanja PCR.
Potrebujete tudi nekaj potrošnega materiala in instrumentov
Dodani so instrument za PCR, cev za PCR, konica pipete, plošča z globoko vdolbino, rezervoar in reagenti