Tehnologija PCR je podobna naravnemu procesu replikacije DNA, njena specifičnost pa temelji na oligonukleotidnih začetnih začetnih elementih, ki so komplementarni obema koncema ciljnega zaporedja. PCR je sestavljen iz treh osnovnih korakov reakcije: denaturacije, žarjenja in podaljšanja. Ta reakcijski postopek poteka v reakcijskem vsebniku PCR. Z nenehnim razvojem instrumenta za pomnoževanje genov je reakcijski vsebnik doživel postopen razvoj centrifugalne epruvete od 1,5 ml do 0.2 ml (0.25 ml) do tankostenske {{ 7}}.2 ml, namenjenih za PCR. , 0.1mlpcr cev. S povečanjem števila PCR pomnoževalnih reakcij se postopoma oblikujejo visoko zmogljive posode za pomnoževanje genov za PCR trakove in PCR plošče.
PCR je sestavljen iz treh osnovnih reakcijskih korakov: denaturacija-žarjenje-podaljšanje
Denaturacija šablonske DNA:
Ko se vzorčna DNK nekaj časa segreje na približno 94 stopinj, se dvoverižna DNK vzorčne DNK ali dvoverižna DNK, ki nastane s pomnoževanjem PCR, disociira, tako da jo je mogoče kombinirati s primerjem za pripravo za naslednji krog reakcije.
Žarjenje (renaturacija) šablonske DNK s primerji:
Potem ko je matrična DNK s segrevanjem denaturirana v eno verigo in se temperatura zniža na približno 55 stopinj, se primerji seznanijo s komplementarnim zaporedjem ene same verige matrične DNK.
Razširitev primerjev:
Pod delovanjem Taq konjugat šablona-primer DNA uporablja dNTP kot reakcijsko surovino za sintezo nove napol rezervirane replikacijske verige, ki je komplementarna vzorčni verigi DNA v skladu z načelom združevanja baz in napol rezervirane replikacije.
Osnovna načela tehnologije PCR
Tehnologija temelji na reakciji encimske sinteze DNK polimeraze v prisotnosti šablonske DNK, primerjev in štirih deoksiribonukleotidov.
DNA polimeraza uporablja enoverižno DNA kot predlogo za začetek sinteze z majhnim delom dvoverižne DNA. En ali dva sintetična oligonukleotidna primerja sta združena s komplementarnim zaporedjem v šabloni enoverižne DNA, da tvorita delno dvoverižno DNA.
Pod primerno temperaturo in okoljem DNA polimeraza doda deoksimononukleotid na 3´-OH konec primerja in ga uporabi kot izhodišče za razširitev vzdolž smeri 5´→3´ matrice za sintetiziranje nove komplementarne verige DNA.
Razlika med PCR epruvetami in centrifugirnimi epruvetami
PCR epruvete:
Reakcijska plošča PCR je 96-vdolbinica ali 384-vdolbinica, ki je zasnovana posebej za šaržne reakcije. Načelo je, da je pretok stroja PCR in sekvencerja na splošno 96 ali 384.
Centrifugalna cev:
Epruveta za centrifugo ni nujno epruveta za PCR. Obstaja veliko vrst centrifugalnih cevi glede na njihovo zmogljivost. Najpogosteje uporabljene so 1,5 ml, 2 ml, 5 ml, 15 ali 50 ml, najmanjša (250 ul) pa se lahko uporablja kot epruveta za PCR.
Kako izbrati epruvete za PCR
Odločili smo se za postavitev epruvet za PCR v upanju, da bomo izbrali najbolj natančno lokacijo za temperaturo.
Najbolj natančen položaj temperature naj bo položaj nad temperaturnim senzorjem pod modulom (ne glede na netočno temperaturo senzorja).
Položaj temperaturnega senzorja različnih PCR instrumentov je drugačen.
Na primer, AB 2720 ima samo enega na sredini, MJ 200 ima tri senzorje, ki so spodaj levo, sredina in zgoraj desno, Eppendorfov bi moral biti v vrsti A ali H, Dongshenglong 811 pa ima tri temperaturne senzorje, B{{3} } je treba izbrati , C1-2, C6-7, D6-7, B11-12, C11-12, ker so te točke temperaturne točke.