Načini za preprečevanje kontaminacije celic: nasveti za pipetiranje, ki jih morate poznati
Med številnimi spremenljivkami, ki so nadzorovane v celični kulturi, ena specifična spremenljivka vpliva na celoten poskus: kontaminacija. Eden od dejavnikov, ki prispevajo k celični kontaminaciji, ni vedno na radarju, in čeprav lahko tiho vpliva na zdravje celic in vpliva na podatke meritev, je to kontaminacija s pipeto.
Izbira pipet, konic pipet in programov pipetiranja je pri načrtovanju poskusov deležna le malo pozornosti. Tudi splošna raztopina (avtoklaviranje) za preprečitev kontaminacije s pipetiranjem morda ne bo tako učinkovita, kot se običajno verjame.
Prvo pravilo celične kulture: izogibajte se kontaminaciji. Zakaj je sterilna tehnika tako pomembna za uspešno celično kulturo?
Aseptična tehnika je edini način za pridobitev zanesljivih in ponovljivih rezultatov. Onesnaženje lahko vpliva na celično rast, metabolizem in zdravje --, nekaj, kar znanstvenike zanima preučevanje. Kontaminirane celične linije nimajo želenih lastnosti in delujejo vsakič drugače, odvisno od resnosti kontaminacije. Tudi, če kontaminanti prerastejo vaše celice, ki vas zanimajo, lahko na koncu preučujete napačen organizem.
S katerimi vrstami onesnaževal se znanstveniki pogosto srečujejo?
Pogosti viri kontaminacije so bakterije, kvasovke in plesen. Pri delu s celičnimi kulturami je najtežje odkriti in izkoreniniti mikoplazmo. Manj običajne vrste kontaminacije vključujejo na primer plastične izlužke v laboratorijskem potrošnem materialu.
Kateri so pogosti vzroki za kontaminacijo celic?
Pogost vir kontaminacije je slabo pipetiranje, kot je uporaba kontaminiranih pipet in konic brez filtra. Poleg tega je problem tudi pomanjkanje dobrih laboratorijskih praks, kot je neustrezna dekontaminacija instrumentov, kot so inkubatorji ali omare z laminarnim tokom. Za odstranitev mikoplazme je potrebna filtracija s filtrom 0.1 µm namesto filtra 0.2 µm.
Tri onesnaženja s pipetiranjem:
1. Kontaminacija s pipeto na vzorec: pipeta ali konica pipete kontaminira vzorec.
Kako se izogniti:
Uporabite sterilne nastavke filtrov, da preprečite kontaminacijo telesa pipete.
Po vsakem vzorcu zamenjajte konico pipete.
Pipete redno avtoklavirajte ali sterilizirajte z etanolom. Izberite pipeto, združljivo z avtoklavom.
2. Kontaminacija vzorca na pipeto: pipetiranje vzorca v telo pipete kontaminira pipeto.
Kako se izogniti:
Uporabite konice filtra ali konice s pozitivnim izpodrivom, da preprečite vstop vzorcev v telo pipete.
Pri pipetiranju naj bo pipeta v navpičnem položaju. Pipeto shranjujte pokonci.
Pri pipetiranju nagnite steklenico.
Počasi spustite gumb, da preprečite brizganje vzorca v pipeto. Izberite pipeto, opremljeno s funkcijo mehkega izmeta.
3. Kontaminacija med vzorci: Ostanki pipetiranih vzorcev se prenesejo v naslednji vzorec. Običajno se pojavi, ko se ista konica uporabi večkrat.
Kako se izogniti:
Po vsakem vzorcu zamenjajte konico pipete.
Uporabite konice filtra ali konice s pozitivnim izpodrivom, da preprečite, da bi vzorec vstopil v telo pipete in na naslednji vzorec.
Prepričajte se, da je konica pipete tesno pritrjena na pipeto, da preprečite puščanje vzorca. Na primer, nasvet Yongyue Medical.
Ali obstajajo dejavniki onesnaženja, ki se jih znanstveniki morda niti ne zavedajo?
Učinkovitost avtoklaviranja pogosto ni preverjena in če avtoklav ne deluje pravilno, konice avtoklavirane pipete morda niso sterilne. Predsterilizirani filtri, zaviti v zaščitno embalažo, so najvarnejša možnost za preprečevanje takšnih nesreč. Postopek predsterilizacije za visokokakovostne konice pipet se redno validira, da se zagotovi učinkovitost predsterilizacije.
Kako orodja za pipetiranje in doziranje znanstvenikom olajšajo rokovanje z vzorci v sterilnem okolju?
Izbira pravih pipet in konic pipet lahko olajša aseptični potek dela. Medicinske pipete Yongyue je enostavno očistiti in odpreti brez orodja, kar pospeši vsakodnevno čiščenje. Ker je avtoklaviranje bolj učinkovito pri odstranjevanju kontaminacije kot robčki z etanolom, so mehanske pipete Sartorius popolnoma avtoklavirane, kar pomeni, da lahko svoje pipete zanesljivo dekontaminirate. Mehak izmet konice preprečuje potencialno nevarnost kontaminacije zaradi brizganja, ko je konica izvržena. Vnaprej sterilizirane konice filtrov ščitijo vaše vzorce pred navzkrižno kontaminacijo. Medicinski nastavki Yongyue so prav tako pakirani v neprepustno embalažo, kar pomeni, da morebitna kontaminacija v pogojih skladiščenja in dostave ne bo prišla v stik s nastavki ali škatlo za nastavke.
Kako se lahko znanstveniki izognejo onesnaževanju? Kateri so vaši najboljši nasveti za sterilno delo?
Prvič, dobra laboratorijska praksa in skrbno načrtovanje delovnih korakov. Poskrbite, da boste v omari z laminarnim tokom obdržali samo tisto, kar je potrebno za določen potek dela, in hkrati uporabite eno celično kulturo. Poleg tega vam redno testiranje na kontaminante, kot je mikoplazma, daje mir in zaupanje v vaše rezultate. Pri delu v sterilnih pogojih je denar, porabljen za predhodno sterilizirane konice filtrov in sterilne reagente, vreden denarja.
