Kot vsi vemo, lahko vrste celic, gojene v laboratoriju, v grobem razdelimo na dve vrsti: adherentne celice in suspenzijske celice, in le nekaj vrst celic obstaja v obeh stanjih.
Suspenzijske celice se nanašajo na vrsto celic, ki lahko rastejo v suspendiranem stanju v mediju, ne da bi se zanašale na podpore, kot so limfociti in večina celic krvnega sistema. (kot so celice mišje levkemije WEHI-3, celice človeške levkemije K-562, HL-60). V industriji je bilo vedno več adherentnih celic udomačenih in gojenih v polni suspenziji. Trenutno se v industriji uporabljajo predvsem celice SP2/0, NS0, CHO, BHK in HEK293, ki se uporabljajo predvsem za proizvodnjo rekombinantnih beljakovin; prehodne celice, ki se običajno uporabljajo v veterinarskih bioloških proizvodih, vključujejo predvsem celice BHK21, gojene v polni suspenziji, celice MDCK; in celice Vero, celice PK, celice ST, celice Marc145 itd. s pomočjo suspenzijske kulture mikronosilcev ima vsaka celica drugačne značilnosti.
Suspenzijske celice
Suspenzijske celice "thp-1" 200x
Na splošno je s suspenzijskimi celicami lažje ravnati kot z adherentnimi celicami, ker za prehod suspenzijskih celic ni potrebna tripsinizacija. Vendar to ne pomeni, da je suspenzijske celice lažje gojiti kot adherentne celice. Za začetnike je bolj zahtevno. Vedno so različni problemi: na primer, zakaj se vedno pojavijo odmrle celice in diferenciacija celic; dogovorjeno je, da je prehod lahek, rezultat pa bo diferenciacija; težave se po kriokonzervaciji in okrevanju spet pojavijo!
Nato se pogovorimo o nekaterih ključnih točkah o gojenju suspenzijskih celic ~
Točka 1: Dovolj potrpljenja, zelo je potrebno
Številne suspenzijske celice imajo razmeroma slabo sposobnost preživetja, ko so pravkar pridobljene iz kriokonzervacije. V tem času moramo biti dovolj potrpežljivi, da počakamo, da celice dokončajo samoobnovo in preidejo v fazo logaritemske rasti. Na primer, THP-1 (človeška monocitna levkemija) pogosto potrebuje 7-10 dni okrevanja od odmrzovanja do normalne proliferacije; Jurkat, klon E6-1 (celice humane T limfocitne levkemije) prav tako potrebujejo 5-7 dni po ozdravitvi. Vrnite se v stanje pred zamrzovanjem. Novinci lahko v tem obdobju opustijo trening, zato bodite bolj potrpežljivi! Gojenje takšnih celic je tudi proces kultiviranja potrpežljivosti!
Točka 2: Zajemite gostoto cepljenja
Na splošno gostota suspenzijskih celic ne sme biti manjša od 500,000/ML. Številne suspenzijske celice so odvisne od gostote in neširjenje, ki ga povzroča nizka gostota, je prav tako ena od pogostih težav novincev. Seveda obstaja zelo malo celic, katerih stanje se ob visoki gostoti poslabša, kot na primer W6/32 (celice hibridoma celic B miši). Zato je zelo pomembno poiskati ustrezne informacije, da bi razumeli značilnosti celic, preden gojimo neznane celice. Samo s poznavanjem sebe in sovražnika lahko zmagaš v vseh bitkah!
Pogostost zamenjave medija ne sme biti omejena na "jasno". Celice so živa bitja. Med neprekinjenim ciklom kulture lahko večkrat dodamo posebna hranila, kot sta dopolnilni medij in glukoza, odvisno od stanja rasti celic, da ohranimo dobro stanje rasti celic. . Med postopkom gojenja suspenzije se bo s proliferacijo celic, porabo hranil v prvotnem mediju in povečanjem metabolitov zmanjšala sposobnost preživetja celic, pravočasno dopolnjevanje hranil pa bo celice postavilo v relativno dobro življenjsko okolje. Tu se ne bom spuščal v podrobnosti in izogibajte se pogostemu centrifugiranju in zamenjavi tekočine.
Pogovorimo se o metodi nadomeščanja tekočine:
①Centrifugalna metoda popolne izmenjave tekočin
To pomeni, odstranite ves stari medij s centrifugiranjem (800-1000rpm, 5 min) in ga nadomestite s svežim medijem. Ta metoda je primerna za zamenjavo srednjega medija za dobro dvignjene suspenzijske celice "kože" (kot je K562) ali trenutno situacijo, ko so celice v dobrem stanju in je gostota visoka, kar ima za posledico veliko porabo medija. Prednost te metode je v tem, da medij temeljito zamenjamo in odstranimo nekaj celičnih ostankov, povzroči pa tudi določeno mehansko poškodbo celic.
②Metoda centrifugalne polovične izmenjave
To pomeni, da s centrifugiranjem (800-1000rpm, 5 min) 50-odstotne celične suspenzije nadomestite 50-odstotni volumen svežega medija. Ta metoda je primerna za primerjavo "hinavskih" celic, ki jih je težko gojiti (kot je thp-1), ali situacije, ko je gostota nizka, vendar je treba v stanju prilagajanja odstraniti več ostankov.
③ Metoda izmenjave sedimentacijske tekočine
To pomeni, da se namesto s centrifugo uporablja metoda naravne sedimentacije s pomočjo gravitacije za ločevanje gojišča od celic, da se nadomesti ves ali del svežega gojišča. Vendar pa ima omejitve pri uporabi – primeren je samo za celice, ki lahko tvorijo celične grozde določene velikosti (sicer se ne morejo naravno usedati in jih je mogoče samo centrifugirati pri nizki hitrosti), zlasti ko imamo opravka s celicami, katerih proliferacija je odvisna od celične agregacije , kot so NK-92, NK- 92 MI, Jurkat. Ta metoda lahko minimizira mehanske poškodbe, ki jih povzroči postopek centrifugiranja med postopkom izmenjave tekočine, hkrati pa ohrani agregirano celično maso, odstranitev celičnih ostankov pa je razmeroma temeljita.
Po obvladovanju zgornjih točk in dobrem celičnem semenu je tik za vogalom vzgoja "lepih" suspenzijskih celic!
ploščo celične kulture
Plošča za celične kulture Yongyue Medical v obliki črke U se večinoma uporablja za gojenje suspenzijskih celic z uporabo medicinskega polistirena (PS), proizvedenega v čistilni delavnici s 100,000-stopnjami, steriliziranega z obsevanjem, brez DNaze, RNaze in pirogena -brezplačno, Varnost in varstvo okolja.
Plošče za celične kulture so na voljo v različnih specifikacijah, da zadostijo potrebam različnih bakterijskih kultur. Vrste izdelkov so razdeljene na 6-dobro, 12-dobro, 24-dobro, 48-dobro, 96-dobro in 384-dobro, katera 96-jama je razdeljena na dno z ravnim dnom, U-dno, V-dno; Kulturne plošče v obliki črke U se večinoma uporabljajo za gojenje suspenzijskih celic; Kulturne plošče v obliki črke V se večinoma uporabljajo za poskuse imunološke hemaglutinacije.
